pcr實(shí)驗(yàn)室 pcr實(shí)驗(yàn)室是什么？

pcr實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。pcr是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的dna片段，可看作生物體外的特殊dna復(fù)制。通過(guò)dna基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別。 pcr實(shí)驗(yàn)室分區(qū) 目前pcr實(shí)驗(yàn)室建設(shè)要求至少應(yīng)該分為三個(gè)區(qū)域，即試劑準(zhǔn)備區(qū)、核酸制備區(qū)和pcr擴(kuò)增區(qū)，如果要對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行開(kāi)放性鑒定，如雜交、電泳等操作，原則需要增加第四個(gè)區(qū)。實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的主要目的是避免純化核酸和擴(kuò)增產(chǎn)物逆向污染前一個(gè)區(qū)域，但多年的經(jīng)驗(yàn)表明，無(wú)論是三區(qū)還是四區(qū)的設(shè)置，似乎都沒(méi)有完全杜絕實(shí)驗(yàn)室污染的發(fā)生。 標(biāo)準(zhǔn)的pcr實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)范應(yīng)包含以下幾個(gè)部分：

1 、pcr實(shí)驗(yàn)室平面布局pcr實(shí)驗(yàn)室裝修必須是單向走廊嗎？ pcr擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室原則上分為四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。 各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。

2、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié) 將 pcr 過(guò)程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和 pcr 擴(kuò)增檢測(cè)三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)，整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)， 通過(guò)氣壓調(diào)節(jié)，使整個(gè) pcr 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。

3、pcr實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增反應(yīng)混合物配置和擴(kuò)增區(qū) pcr實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組pcr實(shí)驗(yàn)，通常應(yīng)經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，若實(shí)驗(yàn)工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過(guò)程。

分析我國(guó)大多pcr實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)項(xiàng)目不難發(fā)現(xiàn)，近80%的實(shí)驗(yàn)室采用熒光pcr試劑盒進(jìn)行臨床檢測(cè)，即這部分實(shí)驗(yàn)室不存在開(kāi)放性核酸鑒定環(huán)節(jié)，試劑工作液的配制多在核酸制備完成后進(jìn)行，依存“試劑配置與pcr擴(kuò)增之間的時(shí)間越短越好”的原則，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的試劑配制均在核酸制備室完成，也就是說(shuō)，試劑配制室的存在基本被忽視，了解了羅氏cobas的操作方式，這種做法便顯得無(wú)可厚非！ 核酸制備完成并加入pcr反應(yīng)液后，移管到擴(kuò)增室，由于采用封閉核酸鑒定的方法，這樣擴(kuò)增室的設(shè)置也同樣顯得多余！以羅氏cobas為鏡，臨床pcr實(shí)驗(yàn)室是否分區(qū)便顯得無(wú)足輕重了！但這并不是說(shuō)pcr實(shí)驗(yàn)室不需要分區(qū)，因?yàn)閮x器自動(dòng)化控制的機(jī)械臂，與實(shí)驗(yàn)室操作人員的操作習(xí)慣和對(duì)規(guī)則的執(zhí)行力是有著本質(zhì)差別的！這或許就是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格分區(qū)后的實(shí)驗(yàn)室，污染同樣存在的主要原因！ 那么pcr實(shí)驗(yàn)室究竟應(yīng)如何建設(shè)才能有利于污染的預(yù)防和有效清除？ 其實(shí)污染就是pcr擴(kuò)增管中摻入了原來(lái)樣本不存在的擴(kuò)增核酸，那么這個(gè)不受歡迎的核酸是怎么來(lái)到pcr擴(kuò)增管里的？如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環(huán)節(jié)，核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)該重點(diǎn)考慮的環(huán)節(jié)。

實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)首先要有通風(fēng)設(shè)置，通風(fēng)是pcr實(shí)驗(yàn)室建設(shè)應(yīng)該考慮的基本條件，如果采用封閉彩鋼板建設(shè)的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)進(jìn)行壓差設(shè)置，即自試劑準(zhǔn)備室、核酸制備室到擴(kuò)增室依次呈負(fù)壓，但清潔新風(fēng)應(yīng)從室外引進(jìn)，新風(fēng)過(guò)濾網(wǎng)應(yīng)定期更換，否則便成為污染的來(lái)源。其次是實(shí)驗(yàn)室墻面和地面具有防水功能，也就是墻面和地面可以水洗！ 每個(gè)房間設(shè)置地漏，方便“實(shí)驗(yàn)室的清潔”，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室污染發(fā)生時(shí)，即可使用“水洗實(shí)驗(yàn)室”的方法有效清除污染，清除過(guò)程使用的是0.2%有效氯溶液，它不但有效斷裂核酸片段，而且還具有淬滅熒光基團(tuán)，有利于pcr實(shí)驗(yàn)室熒光本底的去除。但過(guò)量使用反而會(huì)影響試劑擴(kuò)增效率。消毒液清洗后應(yīng)該使用自來(lái)水或清潔水進(jìn)行再次清洗，特別是設(shè)備表面。實(shí)驗(yàn)室空氣中的污染清除，可以用有效氯溶液進(jìn)行噴霧。

總之，pcr實(shí)驗(yàn)室過(guò)度分區(qū)和分割，不但浪費(fèi)空間，影響人員操作，常常不利于污染物的擴(kuò)散和清除，相信在不久的將來(lái)，隨著試劑盒技術(shù)的發(fā)展，一個(gè)房間可實(shí)現(xiàn)pcr的試劑準(zhǔn)備、核酸純化和pcr擴(kuò)增的所有功能，而污染的預(yù)防和清除也會(huì)顯得十分簡(jiǎn)單。